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CRISPR/Cas9 - PROTÉINES CAS9 - ARN guides synthétiques à façon

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Pôle d'applications

 Analyse Fonctionnelle

En bref

En genome editing CRISPR/Cas9, les systèmes « DNA free » dans lesquels la nucléase Cas9 est délivrée en tant que protéine complexée à l’ARN guide (complexe RNP pour RiboNucléoProtéique) représentent une alternative intéressante, car le complexe RNP est directement fonctionnel dès son entrée dans le cytoplasme sans risque d’intégration de l’ADN. De plus, la délivrance de la nucléase Cas9 conduit à un meilleur contrôle de son expression, atténuant ainsi son activité « Off Target ».

Les ARN guides à façon Alt-R™ CRISPR-Cas9 combinés à la protéine Cas9 de la gamme IDT assurent une efficacité d’édition du génome élevée en raison de leur stabilité élevée et de leur faible toxicité cellulaire.

Descriptif

Protéines Cas9 recombinantes de haute pureté contenant des signaux d’adressage nucléaire (NLS) :
  • Nucléase Alt-R S.p. Cas9 V3 conçue pour une efficacité de genome editing optimale sur un grand nombre de sites
  • Nucléase haute-fidélité Alt-R S.p. HiFi Cas9 V3 assurant des effets "Off-target" minimaux tout en conservant une efficacité de génome editing élevée et dédiée aux applications sensibles
Les ARN guides (ARNg) contiennent la séquence spécifique de la cible permettant de guider la protéine Cas9 vers un emplacement spécifique dans le génome afin d'introduire des modifications génétiques souhaitées.
Trois formats sont disponibles :
  • le duplexe crRNA:tracrRNA
  • le duplexe crRNA XT:tracrRNA
  • l’ARN guide simple brin (« single guide RNA » ou sgRNA)
Pour la plupart des applications le duplexe crRNA:tracrRNA sera le réactif à privilégier car il assure une activité élevée à un prix abordable. Il est composé de 2 parties :
  • le crRNA : séquence spécifique de la cible dont la longueur est optimale pour une performance accrue
  • le tracrRNA : séquence toujours identique quelle que soit la cible
Caractéristiques des ARN guides Alt-R™ :

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